本发明提供了一种尖吻蝮蛇血凝酶-B，其是从尖吻蝮蛇蛇毒中分离到的一种高活性血凝酶，该酶为由236个氨基酸组成的单链糖蛋白，具有SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。链内含有6对二硫键；SDS-PAGE分子量约35kD，脱糖基化后的酶分子量26116.7Da；等电点pI 6.0。酶分子在Asn77,100,229位点上具有杂合多聚糖修饰。该酶为丝氨酸蛋白酶。本发明还提供了该酶的分离纯化方法，包括通过预处理去除不溶物，再通过两次阴离子交换柱层析和一次Sephdex-G75分子筛层析，收集活性洗脱峰，经透析、冻干，即得高纯度蛇毒血凝酶。其比活力不低于2000U/mg，HPLC分析纯度可达95%以上，以蛇毒原料重量计收得率为0.25%－0.30%。
