Methods for in vitro generation of enucleated erythrocytes and enucleated erythrocytes so prepared are provided. Such enucleated erythrocytes can express a sortable surface protein that allows surface modification in the presence of sortase. Also described herein are surface-modified denucleated red blood cells conjugated with a drug of interest such as, for example, a peptide, a detectable label, or a chemotherapeutic agent, and its use in delivering a drug to a subject. [Selection] Figures 16A-F脱核赤血球のin vitro生成のための方法およびそのようにして調製される脱核赤血球が提供される。このような脱核赤血球は、ソルターゼの存在下で表面修飾を可能にするソルタギング可能な表面タンパク質を発現することができる。また、例えば、ペプチド、検出可能な標識、または化学療法剤などの目的薬剤をコンジュゲートした表面修飾脱核赤血球、および被験体への薬剤の送達におけるその使用も本明細書に記載される。【選択図】図16A-F