The present invention provides a method of preparing a cell sheet which is more usefully used in the treatment of damage in living tissue. In particular, the present invention provides a method for preparing a cell sheet which achieves a sufficient functional improvement of an infarcted myocardium by transplanting the cell sheet for an infarcted myocardium in myocardial infarction. More specifically, the present invention relates to a method of preparing a cell sheet, the method comprising: a step for culturing cells on a culture substrate to form a cell sheet derived from the cells a step for culturing the cell sheet under a low oxygen condition at a predetermined temperature for a predetermined period of time and a step for detaching the cell sheet from the culture substrate after cultured under said condition.La présente invention concerne un procédé de préparation dune feuille de cellules qui est utilisée de manière plus utile dans le traitement de lésions dans des tissus vivants. La présente invention concerne en particulier un procédé de préparation dune feuille de cellules qui permet dobtenir une amélioration fonctionnelle suffisante dun myocarde infarci par la transplantation de ladite feuille de cellules destinée à un myocarde infarci dans des cas dinfarctus du myocarde. Plus particulièrement, la présente invention concerne un procédé de préparation dune feuille de cellules, le procédé comprenant : une étape consistant à mettre en culture des cellules sur un substrat de culture pour former une feuille de cellules dérivées desdites cellules une étape consistant à mettre en culture la feuille de cellules dans des conditions à faible teneur en oxygène, à une température prédéfinie, pendant une période de temps prédéfinie et une étape consistant à détacher la feuille de cellules du substrat de culture après ladite mise en culture dans lesdites conditions.本発明は、生体組織の損傷を治療するために用いる上で、より有効な細胞シートを製造する方法を提供する。特に、心筋梗塞における梗塞心において、該細胞シートを移植することにより、梗塞心の十分な機能改善を実現する細胞シート