本发明公开了一种骨骼肌组织块冻存液,1000 mL冻存液由以下原料制成:(1)1-2 g DMEM/F12粉剂溶于蒸馏水中,制成1000 mL DMEM/F12基础培养液;(2)将900 mL DMEM/F12基础培养液与100mL胎牛血清混合,制成DMEM/F12 培养液;(3)将900 mL DMEM/F12培养液与100mL二甲基亚砜混合,制成冻存液。本发明采用胎牛血清、DMEM/F12培养液作为基础液为组织块提供养分,保证细胞内外的渗透平衡,保证组织块内的细胞的环境与体内环境相近,冻存效果好;采用低浓度的二甲基亚砜作为渗透性冷冻保护剂,使冻存保护液对细胞的毒性减小。本冻存保护液直接对猪骨骼肌组织块冻存液,冻存效果好,细胞损伤少,能够为科研提供较高质量的猪骨骼肌组织块以用于培养。