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一种可表达VSV‑G的重组毕赤酵母菌及其制备和应用
- 专利权人:
- 汕头大学
- 发明人:
- 魏炽炬,王靖荃,董莹,刘鑫,李龙
- 申请号：
- CN201610488661.2
- 公开号：
- CN106047739A
- 申请日:
- 2016.06.29
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2016
- 代理人:
- 温旭`张泽思
- 摘要：
- 本发明涉及一种可表达VSV‑G的重组毕赤酵母菌及其制备和应用，重组毕赤酵母菌具有毕赤酵母菌KM71的形态、遗传和生理生化特征，且通过发酵能够表达VSV‑G。制备方法包括（1）采用PCR反应从质粒pLP/VSV‑G中克隆VSV‑G基因片段；（2）制备重组质粒pGM‑T‑VSV‑G；（3）制备重组质粒pPIC3.5K‑VSV‑G；（4）重组表达载体通过电转化法转化毕赤酵母KM71，利用组氨酸缺陷平板、遗传霉素平板及PCR筛选阳性重组子；（5）取阳性重组子进行培养诱导离心收集菌体并用酸性玻璃珠裂解。本发明采取的表达策略为胞内表达，有效消除了甲醇对细胞裂解液的污染。利用毕赤酵母表达系统制备VSV‑G蛋白，裂解液经过滤除菌后可直接用于细胞转染。为VSV‑G的大批量制备提供了基础，也对VSV‑G的研究及相应疾病治疗具有重要意义。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
