本发明公开了提升马铃薯PSTVd抗性的amiRNA及其应用,amiRNA的核酸序列如SEQ ID NO.4所示,利用表达小RNA的策略,表达人工miRNA,获得具有较好的抗PSTVd效果的转基因马铃薯,且与野生型马铃薯在生物学表型上没有明显的差异,该方法不需要长的病源cDNA片段,有效的小RNA不会被大量由长cDNA片段产生的无效的小RNA所稀释,没有同源性的人工miRNA序列可以避免“脱靶”,不会造成植物发育缺陷;还可以可以避免长片段RNA同源互补对农业生产应用中带来的生物安全问题;并且也可以为其他作物的转基因抗病育种工作提供一些理论借鉴,促进我国作物分子抗病育种研究的发展。