本发明公开了一种用于鉴定草莓种质资源炭疽病抗性的引物序列及其鉴定方法。该方法以甜查理、达赛莱克特为杂交亲本进行常规杂交获得的杂交后代等250份材料的基因组DNA为模板,通过对覆盖全基因组146对SSR引物和64对AFLP引物进行PCR扩增并结合PAGE胶电泳分析,建立了草莓炭疽病抗性的特异遗传图谱,成功获得10对特异性高、在杂交后代显性强的SSR引物,其核苷酸序列如SEQ ID No.1~20所示。应用本发明方法获得的引物序列进行草莓种质资源炭疽病抗性的鉴定,其鉴定结果与田间抗病吻合率高达88.4%,该方法具有简单、快速、高效,提高育种效率,缩短育种周期等优点,在草莓种质资源炭疽病抗性的鉴定上具有很大的应用价值。