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马耳他型布氏杆菌的EF-Tu蛋白单克隆抗体MAb及其制备方法与应用
- 专利权人:
- 山东农业大学
- 发明人:
- 王方昆,赵孝民,李宏梅,刘思当,赵宁宁
- 申请号：
- CN201510731321.3
- 公开号：
- CN105218668A
- 申请日:
- 2015.10.30
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2016
- 代理人:
- 摘要：
- 本发明提供了一种布氏杆菌EF-Tu蛋白单克隆抗体MAb及其制备方法与应用，通过将EF-Tu基因克隆到pET30a载体中构建出原核表达载体中表达携带His标签的EF-Tu蛋白，并用纯化的EF-Tu蛋白免疫Balb/c小鼠，取小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合制备杂交瘤细胞，通过特异性筛选、体外培养、纯化而获得抗马耳他型布氏杆菌EF-Tu MAb。本发明在筛选时采用原核表达携带GST标签的EF-Tu纯化可溶蛋白来包被ELISA板，这样不仅可以避免筛选到识别His标签蛋白的MAb，而且可溶的GST-EF-Tu蛋白活性更接近天然的布氏杆菌延伸因子Tu蛋白，保证了杂交瘤细胞的特异性。Westem blot结果表明获得的MAb能够与携带GST或His标签的布氏杆菌EF-Tu蛋白抗原反应，而不与GST标签或大肠杆菌菌体蛋白反应，抗体MAb具有强特异性。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
