PROBLEM TO BE SOLVED: To provide methods of producing pluripotent stem cells from adult cells, in particular, methods of producing pluripotent stem cells from somatic cells without the use of a feeder-cell layer or an agent that increases efficiency of retroviral transfection.SOLUTION: Somatic cells plated on a tissue culture substrate are transduced with a retrovirus containing nucleic acid encoding at least one gene selected from the group consisting of SOX2, OCT4, LIN28 and NANOG, and cultured supplemented with an agent that inhibits Rho kinase activity and bFGF.SELECTED DRAWING: None【課題】成体細胞から多能性幹細胞を作製する方法の提供。特に、フィーダー細胞層又はレトロウイルストランスフェクション効率を増大させる剤を使用せずに、体細胞から多能性幹細胞を作製する方法の提供。【解決手段】組織培養基質上にプレーティングされた体細胞を、SOX2、OCT4、LIN28及びNANOGからなる群から選択される少なくとも1つの遺伝子をコードする核酸を含有するレトロウイルスにより形質導入し、Rhoキナーゼ活性阻害する剤及びbFGFをサプリメントとして培養する。【選択図】なし