本发明公开了一种α1β1整合素依赖增强型CAR巨噬细胞及其制备方法和应用,属于免疫学和肿瘤治疗学领域。所述CAR巨噬细胞包括α1β1整合素跨膜区及胞内信号调控基序、FcγRⅠ胞内信号转导基序、胞外抗原结合区,核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1‑4所示。本发明还将基于α1β1整合素介导FcγRⅠ胞内信号传导域构建CAR巨噬细胞,通过试验证明了该CAR巨噬细胞激活巨噬细胞活化信号并促进巨噬细胞吞噬能力,协同增强抗肿瘤效应。本发明通过设计适用于巨噬细胞信号转导功能的特异性元件,构建了真正意义上的CAR巨噬细胞技术平台,为今后广泛适用于各种CAR巨噬细胞治疗实体肿瘤的应用及延伸设计。