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一种弧菌通用的基因敲除自杀载体及其应用
- 专利权人:
- 中国科学院南海海洋研究所
- 发明人:
- 罗鹏,何香燕,刘秋婷,胡超群
- 申请号：
- CN201510593592.7
- 公开号：
- CN105063073A
- 申请日:
- 2015.09.16
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2015
- 代理人:
- 刘明星
- 摘要：
- 本发明公开了一种弧菌通用的基因敲除自杀载体及其构建方法，并提供了其在弧菌基因敲除中的应用方法。基因敲除自杀载体pLP12，为环状载体，包括PBAD启动子、阻遏蛋白基因araC、RP4转移起始位点、氯霉素抗性基因、R6K复制起始位点、多克隆位点区和致死基因vmi480，所述的多克隆位点区至少包含两个AhdI酶切位点，自杀载体pLP12经AhdI酶切后形成线性化自杀载体pLP12T。本发明的基因敲除自杀载体中采用了全新的反向选择基因vmi480，用于替代常用的sacB基因。pLP12T携带外源片段通过接合方式转移到待突变弧菌细胞，在抗生素以及反向选择致死基因vmi480产物压力下，弧菌先后发生第一次同源重组和第二次同源重组，最终产生目的基因缺失突变株。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
