本发明涉及除草剂技术领域，且公开了利用单碱基编辑技术创造除草剂抗性植物的方法，包括以下步骤：1)GhEPSP基因的sgRNA设计：选择陆地棉5‑烯醇式丙酮酰莽草酸‑3‑磷酸合酶(5‑Enolpyruvylshikimate‑3‑phosphatesynthase，EPSP合酶)为验证基因，利用在线软件CRISPR‑P(http：//cbi.hzau.edu.cn/cgi‑bin/CRISPR)(Lei et al 2014)在基因外显子区域设计sgRNA靶标序列，并且在编辑窗口内C‑T突变改变氨基酸功能的靶点，最终选择1个sgRNA用来构建单碱基系统植物表达载体。该利用单碱基编辑技术创造除草剂抗性植物的方法，在棉花中首次成功应用棉花基因组特性的单碱基编辑系统对棉花GhEPSP实现单碱基突变，突变位点未见其他作物报道，通过叶片草甘膦涂抹实验，表现出一定的草甘膦耐受性，提高了棉田除草效率，降低了人工除草成本，防范棉田超级杂草。
