Provided herein are methods of generating T cells, e.g., cytotoxic T lymphocytes starting from peripheral blood mononuclear cells without a separate step of generating and isolating antigen-presenting cells, and with a single round of antigen stimulation. Also provided herein are methods of using said cytotoxic T lymphocytes, for example, to treat cancer and/or viral infection.La présente invention concerne des procédés de génération de lymphocytes T, par exemple de lymphocytes T cytotoxiques, à partir de cellules mononuclées du sang périphérique sans étape séparée de génération et d'isolement de cellules présentatrices d'antigènes, et avec un seul cycle de stimulation antigénique. L'invention concerne également des procédés d'utilisation desdits lymphocytes T cytotoxiques, par exemple pour traiter le cancer et/ou une infection virale.