本发明公开了一种Psme3条件性基因敲除小鼠模型的构建方法及其应用。所述Psme3条件性基因敲除小鼠模型的构建方法,是利用Cas9/RNA system gene targeting技术,将Psme3基因的第3~5外显子敲除,从而实现整个基因失活,获得了Psme3基因条件性敲除小鼠模型。Psme3作为蛋白酶体激活因子,调节20S蛋白酶体的水解活性,而且调控多种肿瘤相关因子降解。本发明构建得到的Psme3基因条件性敲除小鼠模型为进一步研究Psme3基因的生物学功能奠定了基础,可以为Psme3高表达的实体瘤的发生发展中的作用机制提供理想模型。