本发明涉及一种用于恒温扩增快速检测金黄色葡萄球菌的引物及探针,其中正向引物序列为SEQ ID NO:1,反向引物序列为SEQ ID NO:2;P1探针的序列为SEQ ID NO:3:P2探针的序列为SEQ ID NO:4。同时本发明还提供一种包含上述引物探针序列的,用于恒温扩增快速检测金黄色葡萄球菌的试剂盒,以及应用方法。本发明的试剂盒根据待检菌株的保守基因序列设计引物和探针,从而保证检测方法的特异性。且具有与PCR检测方法相似灵敏度,并且不需要昂贵的PCR仪,只需普通的水浴锅即可。结果不必用凝胶电泳方法来观察,使用通用型核酸扩增物快速检测板检测即可,简单、快速、安全、无污染,特别适用于食品检测机构。