本发明提供可用于诊断人肠道病毒71型感染的试剂盒及诊断方法，试剂盒包括一个或多个固体载体，所述固体载体包括彼此分离的I区和II区；所述I区包括独立地连接于所述固体载体上的多肽集合I，所述多肽集合1包含独立的下述多肽：SEQ ID NO：1所示的多肽；和SEQ ID NO：2所示的多肽；所述II区包括独立地连接于所述固体载体上的多肽集合II，所述多肽集合II包含独立的SEQ ID NO：1所示的多肽。本发明用于检测人血清中肠道病毒71型抗体(IgM和IgG)具有良好的准确率，灵敏度和特异性，适用于肠道病毒71型的病原学实验室辅助诊断，且操作简单，适合各级医疗和疾控部门使用。
