本发明公开了一种突变α‑乳清蛋白表达载体，所述突变α‑乳清蛋白表达载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，该表达载体中将人源α‑乳清蛋白的基因片段的第73位半胱氨酸对应的TGT序列突变为丙氨酸对应的GCT序列，同时在第71位氨基酸和第72位氨基酸之间依次插入ATT、CAG、TCA、AGG和AAC。本发明还公开了一种利用上述突变α‑乳清蛋白表达载体制备HAMLET的方法。该方法解决了现有的通过离子交换层析柱和金属镍螯合柱制备HAMLET的方法中，由于EDTA对NTA金属镍螯合柱清洗作用，增加生产步骤、又增加蛋白质变性、降解的风险，容易导致HAMLET制备失败的问题。建立了一个快速、规模化的HAMLET制备方法。
