本发明涉及一种检测牛或牛早期胚胎性别的引物及其应用。利用牛牙釉基因在两个性染色体上的等位基因存在序列长度多态特点,在相应位点上设计了一对引物,所述引物包括SEQ ID NO.1和2所示的核苷酸序列,本发明利用上述引物采用快速PCR方法对牛早期胚胎进行扩增检测,可在雄性胚胎中检测到长约395bp的Y染色体特异产物条带和长约458bp的X染色体特异产物条带,但只能在雌性胚胎中检测到长约458bp的X染色体特异产物条带。本方法只通过一对引物的PCR扩增,在任意胚胎细胞中均能扩增出性别特异PCR产物,不需设计内标引物,即可实现对被检个体的性别鉴定,成本低廉,操作简便且快速、准确,避免了传统双重PCR方法和巢式PCR方法的复杂操作和较复杂扩增条件的摸索。