本发明提供一种禽白血病病毒J亚群(ALV‑J)特异抗原多肽及其应用。该抗原多肽氨基酸序列为SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5或者其衍生序列,由病毒的囊膜蛋白基因(env)的gp85部分基因编码;其特异性强、亲水性较好,反应性好、纯度高。此外,将该抗原多肽用于制备特异性检测ALV‑J抗体的间接ELISA检测试剂盒,所述检测试剂盒包括包被由一个或者几个如上所述的ALV‑J特异抗原多肽的酶标板以及相关试剂,该试剂盒检测ALV‑J抗体,特异性高,成本低,有利于推广使用,其效果明显优于常规试剂盒和进口试剂盒。上述ALV‑J特异抗原多肽,和由其制备的间接ELISA检测试剂盒适用于评价ALV‑J感染或者净化结果;上述ALV‑J特异抗原多肽适用于制备特异性抗ALV‑J的抗体。