本发明公开了一种糖肽类抗生素耐药基因检测试剂盒,包括探针1~23,其对应序列如SEQ ID NO.1~23所示;还公开了利用该试剂盒进行糖肽类抗生素耐药基因检测的方法:使用本发明糖肽类抗生素耐药基因检测试剂盒进行检测,先要进行实验结果可信度评估,只有当阳性和阴性质控对照的检测结果同时分为别阳性(+)和阴性(‑),才认为该组检测结果可信。当检测对象的三个探针显示的结果一致时可以判断样品是否感染糖肽类抗生素耐药基因;当检测对象的三个探针显示的检测结果不一致时,无法判断该待测样品为阳性或阴性,建议使用该检测试剂盒重新检测或者使用现有其它检测方法进一步验证。本发明操作简单、快速高效、准确性高、结果易读。