연세대학교 산학협력단; YONSEI UNIVERSITY;INDUSTRY-ACADEMIC COOPERATION FOUNDATION, YONSEI UNIVERSITY;INDUSTRY-ACADEMIC COOPERATION FOUNDATION
发明人:
LIM JAE YOL,임재열,KOH WON GUN,고원건,SHIN HYUN SOO,신현수,CHOI JEONG SEOK,최정석
申请号：
KR1020170172257
公开号：
KR1020180027398A
申请日:
2017.12.14
申请国别(地区):
KR
年份:
2018
代理人:
摘要：
The present invention relates to a method of separating glandular stem cells from gland tissue through three-dimensional spheroid culturing and, more specifically, relates to a method of separating gland stem cells through three-dimensional spheroid culturing after dissolving a tissue sample collected from human gland tissue. Moreover, the present invention provides a method of culturing enhanced glandular stem cells through three-dimensional spheroid culturing by culturing separated glandular stem cells or a gland tissue mixed cell line in a micropatterned nanofiber scaffold. More specifically, on a scaffold comprising a nanofiber-based micro area, in which a spheroid is formed, and a hydrogel-based micro area, in which a cell is not attached, a glandular cell, which forms a three-dimensional spheroid-shaped cell cluster of which diameter is 200 μm, is cultured, more advisably, a salivary gland steam cell is cultured, and thus, a functionally enhanced stem cell cluster is separated and cultured. Advantageously, the method is capable of separating and evenly culturing a large amount of functionally excellent glandular stem cells without going through a two-dimensional cell separation and culture stage.본 발명은 3차원 스페로이드 배양을 통한 기능 강화 선조직 유래 선줄기세포의 분리 방법에 관한 것으로, 상세하게는 인간 선(gland) 조직에서 채취한 조직 샘플을 용해 후 3차원 스페로이드 세포배양을 통해 선줄기세포를 분리하는 방법이다. 또한, 본 발명은 분리된 선줄기세포 또는 선조직 혼합 세포주를 마이크로패턴화 된 나노섬유 스케폴드에서 배양하여, 3차원 스페로이드 배양을 통한 기능 강화된 선줄기세포 배양 방법을 제공한다. 더욱 구체적으로는, 스페로이드가 형성되는 나노섬유 기반의 마이크로 영역과 세포의 부착이 일어나지 않는 하이드로젤 기반의 마이크로 영역으로 구성된 스케폴드 상에서 직경 200μm 크기의 3차원 스페로이드 형태의 세포 클러스터를 형성하는 선 세포, 바람직하게는 타액선줄기세포를 배양함으로써, 기능이 강화된 우수한 줄기세포 클러스터를 분리하고 배양해내는 방법에 관한 것이다. 장점은 일반적인 2차원적 세포 분리 및 배양 단계를 거치지 않고 기능이 우수한 선줄기세포의 분리 및 대량 균등 배양을 가능하게 하는 방법에 대한 것이다.
