本发明公开了一种获得瑟伯氏棉五个抗病相关基因cDNA全长的方法,包括以下步骤:培育瑟伯氏棉幼苗,制备黄萎病菌孢子悬液;培养钵中接菌诱导,取瑟伯氏棉幼根,提取RNA,合成cDNA第一链;利用瑟伯氏棉近缘物种雷蒙地棉PGIP等基因的EST序列,进行序列延伸,设计特异引物完成电子克隆;瑟伯氏棉PGIP等基因EST的PCR扩增、回收,连接在pGEM-T Easy Vector上,将PGIP等基因片段转化到感受态细胞DH5α;RACE法克隆cDNA全长,基因组DNA的PCR扩增及回收,纯化目的片段;PGIP等基因的Real Time PCR,序列分析。本发明提供了一种获得瑟伯氏棉五个抗病相关基因cDNA全长的方法,获得了瑟伯氏棉5个抗黄萎病相关基因cDNA全长,为今后克隆野生植物基因提供了一套行之有效的技术路线,具有重要的应用价值。