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一种从新鲜真菌菌丝体中快速提取长片段DNA的方法
- 专利权人:
- 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所
- 发明人:
- 耿涛,王树昌,武华周,郭锡杰
- 申请号：
- CN201810922357.3
- 公开号：
- CN108949749A
- 申请日:
- 2018.08.14
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2018
- 代理人:
- 赵蕊红
- 摘要：
- 本发明公开了一种从新鲜真菌菌丝体中快速提取长片段DNA的方法，包括菌体准备：取新鲜培养的真菌菌丝体，离心滤去水分后称取菌丝体，在液氮中迅速研磨成粉；细胞裂解：加入DNA提取缓冲液，加入60μL浓度为20mg/mL蛋白酶K，混匀后在65℃水浴30min；DNA提取：加入0.33mL浓度为KAc，冰浴20min，后酚:氯仿:异戊醇抽提，离心，取上清液加入无水乙醇沉淀，低温静置30min，离心收集沉淀；纯化处理：加入RNaseA，在37℃处理30min，后25:24:1的酚:氯仿:异戊醇和24:1的氯仿:异戊醇各抽提1次，低温离心5min；取上清液加入无水乙醇沉淀，挑取沉淀，漂洗，风干，溶于TE缓冲液中，保存备用。采用本方法提取的丝状真菌DNA量提高2倍，浓度达到277ng/μL，片段长≥20000bps，无降解，纯度高。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
