Плазмидный вектор pET-pPsLTP, штамм бактерии Escherichia coli BL21(DE3)Star/ pET-pPsLTP-продуцент пищевого аллергена гороха Pis s 3 и способ получения указанного аллергена
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) (RU)
发明人:
Богданов Иван Владимирович (RU),Баландин Сергей Владимирович (RU),Овчинникова Татьяна Владимировна (RU)
申请号：
RU2016129503
公开号：
RU2016129503A
申请日:
2016.07.19
申请国别(地区):
RU
年份:
2016
代理人:
摘要：
1. The plasmid vector pET-pPsLTP, carrying the nucleotide sequence SEQ ID No. 2 for expression in cells of Escherichia coli food allergen pea Pis s 3 having the amino acid sequence of SEQ ID No. 1, in the hybrid protein His8-TrxL-Pis s 3 and consisting of two DNA fragments: - BglII / XhoI-fragment containing the transcriptional promoter of T7 RNA polymerase, lac-operator binding site of the ribosome and a region encoding an affinity tag, thioredoxin protein and allergen Pis s 3 - BglII / XhoI-fragment of plasmid pET31b (+) containing a transcription terminator T7 RNA polymerase, an origin of replication, β-lactamase gene and lac-repressor gene (lacI) .2. The strain of bacteria Escherichia coli BL21 (DE3) Star / pET-pPsLTP - producing a fusion protein His8-TrxL-Pis s 3 produced by transforming the parent strain cells of BL21 (DE3) Star plasmid vector pET-pPsLTP (see p. 1). .3 . A method of preparing a food allergen Pis s 3 comprising the expression of His8-TrxL-Pis fusion protein gene s 3 to producer strain Escherichia coli BL21 (DE3) Star / pET-pPsLTP (see. P. 2), cell lysis, affinity of the fusion protein purification His8-TrxL-Pis s 3 on the metal chelate carrier, the cleavage of the fusion protein His8-TrxL-Pis s 3 cyanogen bromide on methionine residue, introduced between the sequences of allergen Pis s 3 and thioredoxin a retransmission metal chelate purification and target peptide purification via reverse phase HPLC .1. Плазмидный вектор pET-pPsLTP, несущий нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 2 для экспрессии в клетках Escherichia coli пищевого аллергена гороха посевного Pis s 3, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID No. 1, в составе гибридного белка His8-TrxL-Pis s 3, и состоящий из двух фрагментов ДНК:- BglII/XhoI-фрагмента, содержащего промотор транскрипции Т7 РНК-полимеразы, lac-оператор, участок связывания рибосомы и участок, кодирующий аффинную метку, белок тиоредоксин и аллерген Pis s 3- BglII/XhoI-фрагмента плазмиды pET31b(+), содерж
