本发明涉及生物技术领域,具体涉及结核分枝杆菌重组融合蛋白EECC及其制备方法和应用。本发明提供的结核分枝杆菌重组融合蛋白EECC为EAST6‑EAST6‑CFP10‑CFP10,其氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。重组融合蛋白EECC具有优异的抗原性,在进行结核病诊断时,在保证较高特异性的同时具有更高的灵敏度,可有效降低使用剂量,降低检测成本,有效区分诊断结核菌活菌感染、死菌致敏、BCG接种,可用于结核病诊断、结核病疫苗制备、抗原特异的细胞因子的检测,具有较好的推广应用价值。