本发明公开了一种抗猪流行性腹泻病毒猪源化单链抗体及其制备方法,属于生物技术领域。该单链抗体的重链可变区基因序列如SEQ ID NO.1所示,轻链可变区基因序列如SEQ ID NO.2所示;其还包括猪抗体恒定区Fc段基因序列,序列如SEQ ID NO.3所示;重链可变区基因序列与轻链可变区基因序列由连接肽linker序列连接,序列如SEQ ID NO.4所示。本发明中scFv‑Fc的长度为1128bp,翻译成多肽链的分子量约为40kDa左右,是天然免疫球蛋白的1/4,分子量的减小能提高其在组织间的穿透性;Elisa结果显示scFv‑Fc可以对PEDV进行识别。