本发明公开一种用于能同时检测与区分牛环形泰勒虫和东方泰勒虫的引物对和试剂盒。本发明的可用于检测环形泰勒虫的引物对的基因序列分别为:SEQ ID No.1和SEQ ID No.2;可用于检测东方泰勒虫的引物对的基因序列分别为:SEQ ID No.3和SEQ ID No.4。本发明的试剂盒中包括有前述的四条引物。本申请中建立的检测牛环形泰勒虫和东方泰勒虫的多重PCR方法能够很好补充显微镜检测的缺点,方便的检测区分这两种泰勒虫,同时具有灵敏度高、特异性强的优点,可以为发病牛的诊断与治疗提供有力的依据,以及为两种泰勒虫在我国的分布调查提供一种简单有效的诊断方法。