OGORODOVA LJUDMILA MIKHAJLOVNA,Огородова Людмила Михайловна,KREMER ELENA EHDUARDOVNA,Кремер Елена Эдуардовна,KIRILLOVA NATALJA ALEKSANDROVNA,Кириллова Наталья Александровна,SELIVANOVA POLINA ALEKSANDR
申请号：
RU2011154555/10
公开号：
RU0002486238C1
申请日:
2011.12.29
申请国别(地区):
RU
年份:
2013
代理人:
摘要：
FIELD: biotechnology.SUBSTANCE: monocytes are isolated from venous blood MNCs using the Percoll cushion bi-gradient of density: 47.5% SIP and 15% SIP, respectively, at cooling to +4°C. The monocytes are placed in a completely nutritional culture medium with adding 20 ng/ml IL-4 and 20 ng/ml GM-CSF. The completely nutritional culture medium is replaced on the day 3 of cultivation. On the day 4 of cultivation the antigen of infectious origin Opisthorchis felineus is added at a dose of 40 mcg/ml and maturation of dendritic cells is simultaneously induced with lipopolysaccharide E.coli of serotype 055: B5 in a dose of 1 mcg/ml. On the day 6 of cultivation the dendritic cells are washed and analysed.EFFECT: use of the method provides obtaining the mature, antigen-loaded dendritic cells.2 dwgИзобретение относится к иммунологии и биотехнологии. Предложен способ нагрузки дендритных клеток инфекционным антигеном Opisthorchis felineus. Выделяют моноциты из МНК венозной крови с использованием двойного градиента плотности перколла: 47.5% SIP и 15% SIP, соответственно, при охлаждении до +4°С. Моноциты помещают в полную питательную культуральную среду с добавлением 20 нг/мл ИЛ4 и 20 нг/мл ГМ-КСФ. Проводят замену полной питательной культуральной среды на 3 сутки культивирования. Добавляют на 4 сутки культивирования антиген инфекционного происхождения Opisthorchis felineus в дозе 40 мкг/мл и одновременно индуцируют созревание дендритных клеток липополисахаридом E.coli серотипа 055:В5 в дозе 1 мкг/мл. На 6 сутки культивирования дендритные клетки отмывают и анализируют. Использование способа обеспечивает получение зрелых, нагруженных антигеном дендритных клеток, с выраженностью маркера HLA DR 95%, что может найти применение в терапии аллергических заболеваний. 2 ил.
