利用核酸外切酶的3’-5’外切酶活性克隆目的DNA的方法
- 专利权人:
- 中国农业科学院作物科学研究所
- 发明人:
- 刘斌,李宏宇,林辰涛
- 申请号：
- CN201110393988.9
- 公开号：
- CN102443596A
- 申请日:
- 2011.12.01
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2012
- 代理人:
- 王朋飞`王加岭
- 摘要：
- 本发明提供了一种利用核酸外切酶的3’-5’外切酶活性克隆目的DNA的方法，其是向含有线性载体和目的DNA片段的体系中加入具有3’-5’外切酶活性的核酸外切酶，在冰上消化30sec～3min，使两者产生具有同源序列的5’末端，然后在70～75℃下使酶失活，最后退火使线性载体和目的DNA片段重组形成带有缺刻的环形质粒，并转化到大肠杆菌中修复缺刻并随宿主基因组进行复制。本发明通过使酶热失活而终止消化反应，操作简单易行，同时也继承了其它LIC系统阳性率高的优势，因此适用于大规模的基因克隆及载体构建。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
