本发明公开了一种利用巢式PCR方法检测猫艾滋病病毒的引物组、含有该引物组的试剂盒及其用途。本发明根据猫艾滋病病毒Gag基因的相对保守区设计合成了内套、外套两对引物,其中内套引物中上游引物的碱基序列如SEQ ID NO.1所示,下游引物的碱基序列如SEQ ID NO.2所示,外套引物中上游引物的碱基序列如SEQ ID NO.3所示,下游引物的碱基序列如SEQ ID NO.4所示。此外,本发明通过对反应体系与反应条件的优化,建立了猫艾滋病病毒巢式PCR精准检测方法。特异性实验结果表明本发明方法能够对猫艾滋病病毒进行特异性检测,且设计合成的引物对之间以及引物与其他病毒之间无交叉反应,因此本发明可用于临床猫艾滋病病毒的快速诊断和流行病学调查,具有一定的实用性。