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氨基酯衍生物
- 专利权人:
- 奇斯药制品公司
- 发明人:
- E·阿玛尼,G·阿玛利,C·卡帕尔蒂,W·布莱卡比,I·林尼,H·范德波尔,C·贝克-格伦,N·特利维蒂
- 申请号：
- CN201580029748.7
- 公开号：
- CN106459020B
- 申请日:
- 2015.03.06
- 申请国别(地区):
- CN
- 年份:
- 2019
- 代理人:
- 摘要：
- 本发明涉及为磷酸二酯酶4(PDE4)的酶抑制剂和毒蕈碱M3受体拮抗剂的新化合物、制备这样的化合物的方法、含有它们的组合物及其治疗用途。M3结合测定:将表达人M3‑受体的CHO‑K1克隆细胞(Swissprot P20309)收获在不含Ca++/Mg++的磷酸盐缓冲盐水中,并且通过在1500rpm离心3min进行收集。将沉淀物再悬浮于冰冷的缓冲液A(15mM Tris‑HCl pH 7.4,2mM MgCl2,0.3mM EDTA,1mM EGTA)中,并且用PBI politron(设定在5保持15s)均质化。通过在4℃在40000g 20min的2个连续离心步骤,收集粗膜级分,通过在缓冲液A中的洗涤步骤,进行分离。最后将得到的沉淀物再悬浮于缓冲液B(75mM Tris HCl pH 7.4,12.5mM MgCl2,0.3mM EDTA,1mM EGTA,250mM蔗糖),并且将等分试样在‑80℃储存。在实验当天,将冷冻的膜再悬浮于缓冲液C(50mM Tris‑HCl pH 7.4,2.5mM MgCl2,1mM EDTA)。将非选择性的毒蕈碱放射性配体[3H]‑N‑甲基东莨菪碱(Mol.Pharmacol.45:899‑907)用于标记M3结合位点。在0.1‑0.3nM的放射性配体浓度,在96孔平板中,一式两份地进行结合实验(10点浓度曲线)。在有冷N‑甲基东莨菪碱(10μM)存在下测定非特异性结合。将样品(终体积0.75mL)在室温温育90min。通过穿过GF/B Unifilter平板快速过滤来终止反应,并使用Packard Filtermate Harvester用冷缓冲液C洗涤2次(0.75mL)。用微量培养板闪烁计数器TriCarb 2500(PerkinElmer)测量过滤器上的放射性。当用上述报道的方案之一测定时,本发明的代表性化合物表现出低于100nM的IC50。本发明的代表性化合物在PDE4无细胞和M3结合测定中均表现出低于100nM的IC50。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
