本发明涉及一种拟穴青蟹抗真菌型抗脂多糖因子SpALF4及其制备方法与应用,该抗脂多糖因子的基因序列为SEQ ID NO1,其氨基酸序列为SEQ ID NO2。通过构建拟穴青蟹抗脂多糖因子SpALF4的重组表达载体,将重组表达载体导入宿主细胞,并诱导宿主细胞表达,获得含SpALF4的表达产物,经分离纯化后,获得重组蛋白,即SpALF4。所述抗真菌型抗脂多糖因子SpALF4蛋白不但对多种水生动物细菌具有明显的抑制作用,可以应用于水产动物抗微生物新药和抗病原微生物饲料添加剂,且对高等哺乳动物的真菌病原如白色念珠球菌也具有明显抑制效果,可用于高等哺乳动物抗真菌药物的开发。