本发明提供了一种多功能抗草甘膦水稻转化载体pCDMAR‑epsps及其构建方法和应用,其特征在于,载体pCDMAR‑epsps的大小为12774bp,序列如SEQ ID NO:1所示;构建方法包括骨架选择、含pCDMAR‑hyg骨架的感受态细胞制备及培养、酶切、连接、pCDMAR‑UbiEP中间产物的获得、带有酶切位点的T‑nos片段的获得、酶切连接。本发明的有益效果在于:本发明的一种多功能抗草甘膦水稻转化载体pCDMAR‑epsps较现有技术具有更好的安全性,而且对外源基因的稳定性和表达水平具有一定的优势,同时单插入位点中的多酶切位点还为实现同时转入2个及2个以上的多基因聚合育种的可能性。