The invention provides methods to prepare protein conjugates from proteins having at least four accessible cysteine residues. In one embodiment, an antibody with four reducible disulfide linkages is reduced to provide four pairs of free cysteines. Each pair of free cysteines is reacted with a 1,3-dihaloacetone or similar reactant, linking the sulfur atoms of each pair together though a 3-carbon tether with a reactive ketone. A pair of these reactive ketones are linked together with and used to attach a single payload molecule, thus conjugating the antibody to two payload groups. This method gives a stabilized antibody conjugate with high selectivity for a ratio of two payloads per antibody.L'invention concerne des procédés pour préparer des conjugués de protéines à partir de protéines possédant au moins quatre résidus de cystéine accessibles. Dans un mode de réalisation, un anticorps possédant quatre liaisons disulfure réductibles est réduit pour fournir quatre paires de cystéines libres. Chaque paire de cystéines libres est mise à réagir avec un 1,3-dihaloacétone ou un réactif similaire, liant les atomes de soufre de chaque paire à une cétone réactive par l'intermédiaire d'une chaîne de liaison à 3 carbones. Chacun des éléments de la paire de ces cétones réactives est lié avec une molécule à charge utile unique, et utilisé pour l'y fixer, conjugant ainsi l'anticorps à deux groupes de charge utile. Ce procédé procure un conjugué d'anticorps stabilisé présentant une sélectivité élevée avec un rapport de deux charges utiles par anticorps.
