本发明公开了一种鉴别鸡白痢沙门氏菌与鸡伤寒沙门氏菌的引物组、试剂盒及方法,该引物组包括两对特异性引物,其中,两对特异性引物分别是引物1和引物2,引物3和引物4,其中,引物1由SEQ ID NO:1所示,引物2由SEQ ID NO:2所示,引物3由SEQ ID NO:3所示,引物4由SEQ ID NO:4所示;该试剂盒中包含所述引物组;利用引物组通过双重PCR扩增方法对待测细菌进行检测。本发明的鉴别鸡白痢沙门氏菌与鸡伤寒沙门氏菌的引物组的检测反应特异性强;通过PCR反应,能够从样品中同时检测出鸡白痢与鸡伤寒沙门氏菌,检测反应灵敏度高,且检测过程快速、高效,适合进行大批量检测。