本发明提供了一种基于已有模板抗菌肽序列Ala Pro Lys Ala Met Lys Leu Leu Lys Lys Leu Leu Lys Leu Gln Lys Lys Gly Ile(NCBI数据库收录号:AJN45154)设计合成的新抗菌肽JSKJ01,本发明同时提供人工设计合成抗菌肽JSKJ01的制备方法,本发明还提供抗菌肽JSKJ01的应用方法;人工设计合成抗菌肽JSKJ01具有显著的抑制细菌以及真菌生长的作用,尤其是对耐药细菌有很好的抑制作用;与设计模板比较,在保留模板抗菌活性的同时,针对部分细菌菌株新设计抗菌肽JSKJ01的活性优于设计模板;人工设计合成抗菌肽JSKJ01具有结构简单、人工合成方便、抗菌谱系广的有益特点;其显著特点在于无药物残留,对多种水产细菌性病害的预防和治疗效果显著;可以应用于人或动物感染性疾病的预防和治疗,特别是在水产上的应用。