A method for the separation, isolation and characterization of steviol glycosides is provided. A comprehensive method for the separation, isolation and characterization of two or more combinations of steviol glycosides from extracts of Stevia rebaudiana plants and their use in sweetening compositions are disclosed. A combination of two or more steviol glycosides from Stevia rebaudiana is characterized. A combination of two or more of the steviol glycosides can be used as a sweetness enhancer, flavor enhancer, and sweetener in foods, beverages, cosmetics and pharmaceuticals. Also disclosed is a method of isolating two or more combinations of steviol glycosides. [Selection] Figure 1【課題】ステビオール配糖体の分離、単離及び特徴付けのための方法を提供する。【解決手段】ステビア レバウディアナ植物の抽出物からのステビオール配糖体の2種以上の組み合わせの分離、単離及び特徴付けのための包括的な方法並びに甘味組成物におけるそれらの使用が開示される。ステビア レバウディアナからのステビオール配糖体の2種以上の組み合わせが特徴付けられる。該ステビオール配糖体の2種以上の組み合わせは、甘味増強剤、香味増強剤並びに食品、飲料、化粧品及び医薬品における甘味料として使用され得る。ステビオール配糖体の2種以上の組み合わせの単離方法もまた開示される。【選択図】図1