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一种热带雨林土壤微生物宏基因组Fosmid文库构建方法
- 专利权人:
- 海南省农业科学院植物保护研究所
- 发明人:
- 赵志祥,严婉荣,肖敏,陈绵才,曾向萍
- 申请号:
- CN201710757204.3
- 公开号:
- CN107475244A
- 申请日:
- 2017.08.29
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2017
- 代理人:
- 黄耀钧
- 摘要:
- 本发明属于微生物领域,公开了一种热带雨林土壤微生物宏基因组Fosmid文库构建方法,采用PVPP洗涤,去除杂质后,溶菌酶—蛋白酶K—SDS—CTAB裂解法,提取和纯化大片段的土壤微生物基因组DNA;经琼脂糖凝胶低电压电泳和脉冲电泳检测;末端修复宏基因组DNA,将marker和小样切下,使用连接酶将回收产物连接到Fosmid载体pCC1FOS上;连接反应在2h内完成;连接产物经λ包装提取物包装,EPI300‑T1R菌株转染,涂于含12.5μg/mL的氯霉素的LB平板上,37℃,过夜培养。本发明反映在热带雨林这一极端的环境中,微生物及其基因资源极端而丰富,有利于微生物功能基因挖掘与利用。
- 来源网站:
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址:
- http://www.ckcest.cn/home/