本发明属于植物基因工程领域。从水稻基因组中克隆了同一胚乳特异表达基因(登录号为GI:31415924)上游6个不同长度的启动子(EnP3、EnP3-859、EnP3-678、EnP3-471、EnP3-292和EnP3-110),其核苷酸序列如SEQ ID NO:1-6所示;其中5个启动子(EnP3、EnP3-859、EnP3-678、EnP3-471和EnP3-292)仅在转化植株的胚乳表达,并且随着胚乳发育阶段的不断进行,表达量呈现下降趋势;在其他组织如叶片、叶鞘、茎杆、根、花、颖壳及胚中均检测不到表达。启动子EnP3-110在叶片、叶鞘、茎杆及颖壳这些绿色组织中可以检测到表达,但是在根、花及种子(包括胚和胚乳)中却检测不到表达,成为一个短的绿色组织特异表达启动子。公开了6个启动子及其相应表达载体的制备方法,以及通过农杆菌介导的转基因方法导入水稻的应用。