The present invention relates to a circular-shaped DNA molecule, useful in gene therapy, comprising at least one nucleic sequence of interest, characterized in that the region allowing its replication comprises an origin of replication whose functionality in a cell host requires the presence of at least one specific protein foreign to said host cell. It also relates to a corresponding preparation method, cells incorporating said DNA molecules and their uses in gene therapy.La présente invention se rapporte à une molécule d'ADN de forme circulaire,utile en thérapie génique, comprenant au moins une séquence nucléiqued'intérêt, caractérisée en ce que la région permettant sa réplication comprendune origine de réplication dont la fonctionnalité dans une cellule hôterequiert la présence d'au moins une protéine spécifique et étrangère à laditecellule hôte. Elle a également pour objet un procédé de préparationcorrespondant, des cellules incorporant lesdites molécules d'ADN et leursutilisations en thérapie génique.