本发明公开一种快速检测血液中附红细胞体、钩端螺旋体、弓形虫的试剂盒及应用。该试剂盒由可拆分的96孔PCR管、PCR反应液、Taq DNA 聚合酶、标准品、对照品组成。PCR反应液含有PCR 缓冲液、dNTPs、MgCl2、KCl、明胶、各检测用引物,各检测用引物分别为附红细胞体、钩端螺旋体、弓形虫的特异性引物。该试剂盒在检测血液中是否感染附红细胞体、钩端螺旋体、弓形虫中单个或多个病原体的应用。本发明试剂盒检测速度快,检测灵敏度高、特异性好,操作简便,同时对单个或多个混合感染红细胞体、钩端螺旋体、弓形虫的标本进行鉴别检测,大大提高了检测准确率,降低了假阳性率。