本发明公开了一种中和狂犬病病毒活性的单克隆抗体及能够持续、稳定分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞。本发明以狂犬病病毒CTN-1V株灭活病毒为免疫原,所制备的单克隆抗体具有中和活性,特异性地识别狂犬病病毒糖蛋白,所述的单克隆抗体的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示,轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。利用本发明所述的单克隆抗体制备的检测制品,如ELSIA试剂及胶体金试剂,可用于人用狂犬病疫苗中糖蛋白抗原的检测,可用于疫苗生产过程中的质量控制,具有较强的应用价值。因该单克隆抗体具有中和活性,亦可用于制备治疗狂犬病的药物用途。