本发明属于分子生物学领域,公开了南瓜耐旱基因CmNAGS及其抗除草剂植物表达载体。本发明所提供的南瓜耐旱基因CmNAGS序列为SEQ ID NO.1。其抗除草剂植物表达载体由所述的南瓜耐旱基因CmNAGS插入到中间载体pCAMBIA3301-T800的Sac I和Xba I位点得到。本发明含CmNAGS基因的植物表达载体可用于农作物遗传转化,CmNAGS基因在CaMV35S启动子的启动下超量表达,合成催化精氨酸生物合成途径第一步反应的N-乙酰谷氨酸合成酶,可使植物体内精氨酸、鸟氨酸、瓜氨酸含量提高,增强植物耐旱性。同时,bar基因编码膦丝菌素乙酰转移酶,可使转基因作物对抗以膦丝菌素为有效成分的Basta、Liberty等除草剂。