一种用于检测猪水泡病病毒的Taqman Real-time RT-PCR试剂盒及其使用方法,所述试剂盒包含One Step RT-PCR buffer 、酶混合物、阳性对照、无RNA酶水、序列SEQ ID NO:1和 SEQ ID NO:2的引物及SEQ ID NO:3的探针引物的混合物;所述使用方法包括使用所述试剂盒进行RT-PCR扩增的步骤及评定标准。本发明设计了特异性针对猪水泡病病毒的引物及探针,经过前期试验筛选后选取灵敏度和特异性良好的引物及探针,优化反应条件和引物探针应用浓度,优化并组装成试剂盒。本发明能快速、敏感、准确以及低成本地对猪水泡病病毒进行检测及定量分析。