A method of making a sterile connection with a fluid in a container. The container has a sealing member sealing the first end of the container and a barrier sealing the chamber in fluid communication with the sealing member. The method comprises the steps of providing a flexible sleeve having a flexible portion at the end of the flexible sleeve, a hollow first penetrator disposed within the flexible sleeve, at least a partial And a hollow second penetrating body disposed in the valve sleeve assembly. The interior of the flexible sleeve is sterile. The method also includes moving the second penetrator relative to the first penetrator and the sealing member so as to pierce the barrier portion and the barrier with the first penetrator and pierce the sealing member , Making a sterile connection with the interior of the container.容器内の流体との無菌接続を作る方法。その容器は、容器の第1の端部を封止する封止部材と、その封止部材と流体連通するチャンバを封止するバリアとを有する。当該方法は、可撓性スリーブの端部にバリア部を有する可撓性スリーブと、その可撓性スリーブ内に配置された中空の第1の貫通体と、第1の貫通体内に少なくとも部分的に配置された中空の第2の貫通体とを含むバルブスリーブアセンブリを設けることを含む。可撓性スリーブの内部は、無菌である。また、当該方法は、第1の貫通体により、バリア部分およびバリアを突き通し、その封止部材を突き通すように、第2の貫通体を第1の貫通体および封止部材に対して移動させ、容器の内部との無菌接続を作ることを含む。