本发明公开了一种表达H7N9亚型高致病性禽流感病毒HA蛋白的重组火鸡疱疹病毒的构建与应用。该重组火鸡疱疹病毒为在火鸡疱疹病毒(HVT)的编码序列的非必需复制区中的HVT‑065和HVT‑066基因之间插入外源基因表达盒;其中,外源基因表达盒由MCMV启动子、外源基因和SV40 poly A依次连接而成;所述的外源基因为H7HA基因,其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明还提供该重组火鸡疱疹病毒的构建方法,是利用超声裂解破碎的方法进行纯化,缩短筛选的时间,获得的重组火鸡疱疹病毒rHVT‑H7HA对高致病性H7N9亚型禽流感病毒提供良好的保护,可用于后续开发新型的禽流感病毒疫苗。