本发明提供了一种纯化埃博拉病毒抗原蛋白的方法,包括以下步骤:(1)将埃博拉病毒抗原蛋白的表达产物用高盐裂解液重悬,随后进行超声破碎和离心;(2)将离心所得的沉淀,用2mol/L尿素(10mmol Tris pH8.0)重悬,再次重复进行超声破碎和离心;(3)然后再用2mol/L尿素(10mmol Tris pH8.0)重悬,再次重复进行超声破碎和离心;(4)将离心所得的沉淀用8mol/L尿素(10mmol Tris pH8.0)重悬,离心10分钟;(5)将所得的上清使用DEAE层析纯化;(6)疏水层析纯化;(7)透析复性;(8)强阴离子交换层析;(9)分子筛凝胶过滤;从而得到纯化的埃博拉病毒抗原蛋白。本发明还提供了由上述方法获得的抗原蛋白和包含其和免疫佐剂的埃博拉病毒疫苗,以及所述抗原蛋白或疫苗在制备用于预防或治疗埃博拉病毒感染的产品中的应用。