一种检测烟草轻型绿花叶病毒(Tobacco mild green mosaic virus,TMGMV)的RT-PCR引物及其方法,本发明根据GenBank发布的TMGMV核苷酸序列的高保守区所设计引物,该引物对烟草轻型绿花叶病毒是特异的,除了特异性好之外,还具有对不同的TMGMV分离物覆盖率最高的特点,能有效检测到不同的TMGMV分离物,检测结果更加准确,而且检测时不需加辅助引物,更加方便。本发明的检测方法可适用于批量茄科作物TMGMV的分子检测,在降低了检测成本,减少了工作量的同时,保留了快速、准确、灵敏度高等优势。