PURPOSE: A manufacturing method of xenogeneic bone originated bone graft substitute is provided to manufacture a xenogeneic bone originated bone graft substitute comprising pure hydroxyapatite with the excellent biocompatibility, cell adhesive ability and osteoconductivity by completely removing protein and fat from the xenogeneic bone. CONSTITUTION: A manufacturing method of xenogeneic bone originated bone graft substitute comprises the following steps:(i) step of cutting xenogeneic bone;(b) step of removing the blood component of the xenogeneic bone;(c) step of first removing fat and protein from the xenogeneic bone;(d) step of second removing fat and protein from the xenogeneic bone using an organic solvent;(e) step of removing the organic solvent;(f) step of processing the xenogeneic bone with sodium hypochlorite solution;(g) step of removing sodium hypochlorite solution;(h) step of completely removing the lipid and protein by heat-treating the xenogeneic bone;(i) step of cutting the xenogeneic bone in a block form; and(j) step of adding a bioactive substance to the xenogeneic bone.본 발명은 이종골을 사용하여 생체적합성, 세포부착능 및 골전도성이 우수한 골이식재 및 그 제조방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 골이식재 제조방법은 기존의 이종골 유래 골이식재에 비해 단백질의 함량이 낮아 생체적합성이 우수하여 이식부위의 조직에서 염증반응 없이 잘 융합될 수 있는 골이식재를 제공할 수 있을 뿐만 아니라, 산성 아미노산으로 표면을 처리함으로써 골세포의 부착능을 증가시킬 수 있고, 생리활성인자를 도입하여 신생골의 전도도 향상시킬 수 있다.