The present invention provides an improved method for preparing protein conjugates from ketone-modified proteins. In one embodiment, the protein is prepared by linking two free cysteines by linking together the sulfur atoms of two cysteines by reaction with 1,3-dihaloacetone or similar ketone-containing reactants. Subsequently, the ketone inserted between the sulfur atoms is used to form the oxime, whereby the protein is conjugated to the payload. In another embodiment, the two cysteine residues are tied together by reaction with 1,3-dihaloacetone or similar reactants, and a new ketone is used to form the oxime with the appropriate payload molecule, . This method provides improved reaction conditions for oxime formation, thereby achieving higher yields and improved product homogeneity.본 발명은 케톤-변형된 단백질로부터 단백질 접합체를 제조하는 개선된 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 단백질은 1,3-디할로아세톤 또는 유사한 케톤-함유 반응물과의 반응에 의해, 2개의 시스테인의 황 원자를 함께 연결시켜 2개의 유리 시스테인을 연결시킴으로써 제조된다. 이어서, 황 원자 사이에 삽입된 케톤이 옥심을 형성하는데 사용되고, 이에 따라 단백질이 페이로드에 접합된다. 또 다른 실시양태에서, 2개의 시스테인 잔기는 1,3-디할로아세톤 또는 유사한 반응물과의 반응에 의해 함께 묶이고, 새로운 케톤이 적합한 페이로드 분자와 옥심을 형성하는데 사용되고, 이에 따라 단백질이 페이로드에 접합된다. 이러한 방법은 옥심 형성을 위한 개선된 반응 조건을 제공하며, 그에 의해 더 높은 수율 및 개선된 생성물 균질성이 달성된다.
